***、 開機準備：環境與耗材合規設置（耗時：<5分鐘）

運行環境確認：

設備放置于穩定水平臺面 ，散熱口預留≥10cm空間 。

環境溫度：15–30℃ | 相對濕度：≤80% | 避免強電磁干擾源。

連接穩壓不間斷電源（UPS） 防止電壓波動中斷實驗。

啟動設備：

按下前面板電源鍵，等待系統自檢完成 （約1分鐘），觸摸屏顯示主菜單。

耗材選擇與裝載：

關鍵提示： 使用非認證耗材可能導致密封失效、導熱不均，影響擴增效率！ 

僅使用賽默飛認證耗材 （如MicroAmp? 96孔反應板、0.2mL單管）。

確認反應板/管與熱循環模塊凹槽匹配 （避免翹曲）。

輕柔平放 反應板至模塊中心，確保無傾斜。

二、 程序創建與參數設置（耗時：2-3分鐘）

新建程序：

主菜單選擇 Protocol → Create New → 輸入程序名稱（如 SARS-CoV-2_Ngene）

設置溫度步驟（核心操作）：

步驟類型 溫度 持續時間 循環數 應用場景

預變性 95℃ 3-5分鐘 1 模板DNA整體變性

變性 95℃ 30秒 35 雙鏈DNA解離

退火 55-65℃ 30秒 ↑ 引物特異性結合

延伸 72℃ 1分鐘/kb ↑ DNA聚合酶合成產物

終延伸 72℃ 5-10分鐘 1 補齊末端產物

保存 4-10℃ ∞ 1 產物短期存儲

退火溫度： 根據引物Tm值優化（推薦賽默飛在線工具[Primer Design Tool ]）

延伸時間： 按擴增片段長度計算（1kb=60秒）

熱蓋溫度設置（防蒸發關鍵）：

96孔板：High （高壓模式）

0.2mL單管：Low （低壓模式）

進入 Lid Temperature 選項，設置為 105°C （推薦值）。

適用耗材類型：

三、 啟動運行與實時監控（擴增中操作）

啟動程序：

裝載樣本后關閉熱蓋，點擊 Start → 確認程序參數 → 再次點擊 Start。

系統自動檢測熱蓋壓力，屏幕顯示 "Run in Progress" 。

運行監控要點：

溫度追蹤： 實時顯示當前模塊溫度、目標溫度及剩余時間。

異常報警： 若出現 "Lid Open" （熱蓋未關嚴）、"Over Temp" （超溫）告警，立即暫停檢查。

避免干擾： 運行期間勿開啟熱蓋 ，防止溫度驟變影響擴增。

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